Le gène de la lectine liant le mannose, MBL, les polymorphismes ne sont pas associés à la sensibilité aux maladies invasives à pneumocoques chez les enfants

Enfants danois âgés de & lt; les années avec diplotypes MBL défectueux n’étaient pas à risque plus élevé de méningite à pneumocoques ou de bactériémie que les enfants avec diplotypes normaux Il n’y avait pas d’association entre les diplotypes et la mortalité ou entre les diplotypes et les sérotypes pneumococcique sites

Contexte La plupart des enfants sont colonisés de manière transitoire par Streptococcus pneumoniae, mais très peu développent une maladie pneumococcique invasive IPD La variation génétique de l’immunité innée peut prédisposer au DPI Nous avons étudié l’effet de la variation génétique du gène MBL de la lectine liée au mannose sur la sensibilité et la sévérité de la maladie. des IPD chez des enfants auparavant en bonne santé âgés de & lt; Les sérotypes pneumococciques ont été déterminés par la réaction de Quellung. Les associations entre les diplotypes MBL et la sensibilité aux IPD, les sérotypes et les résultats ont été étudiés en utilisant l’analyse de régression logistique. Résultats Nous avons inclus des cas de méningite, avec bactériémie et témoins appariés selon l’âge et le sexe; les individus ont été génotypés avec succès et ont obtenu des diplotypes MBL L’âge médian dans notre série de cas combinés était de mois Les enfants avec diplotypes défectueux n’étaient pas à risque plus élevé de méningite que les enfants avec d’autres diplotypes odds ratio [OR],; % intervalle de confiance [IC], – Des résultats similaires ont été trouvés pour la bactériémie OR; % CI, – ainsi que pour tous les cas OU; % IC, – Il n’y avait pas d’association avec la susceptibilité à IPD récurrente n = pour les enfants avec diplotypes défectueux par rapport aux cas avec un seul épisode OU; % CI, – et avec tous les contrôles OU,; % CI, – Il n’y avait pas d’association entre diplotypes et mortalité ou entre diplotypes et sérotypes pneumococciquesConclusions Les polymorphismes MBL défectueux ne prédisaient pas une augmentation de la sensibilité aux IPD chez les enfants nés en Europe du Nord

Génotypes MBL, carence en MBL, pneumococcie invasive, sérotypes pneumococciquesStreptococcus pneumoniae demeure une cause majeure d’infection invasive potentiellement mortelle chez les nouveau-nés et les jeunes enfants Globalement, les décès associés à des millions de cas de pneumococcie se produisent chaque année chez les enfants âgés de moins de 18 ans. ans Les enfants sont souvent colonisés par S pneumoniae dans le nasopharynx, mais seulement un petit nombre d’entre eux développent une maladie invasive Les facteurs immunitaires de l’hôte jouent un rôle important dans la défense de première ligne contre les infections. La lectine liant le mannose est une protéine pro-inflammatoire impliquée dans l’activation du complément par la voie des lectines dans le système immunitaire inné et le système du complément fournit une défense immédiate de l’hôte contre l’infection Une fonction essentielle de la MBL est indépendante des anticorps et du complément. activation de la cascade du complément par liaison aux sérine protéases associées à la MBL MASP Les concentrations plasmatiques de MBL ont jusqu’à une variation interindividuelle causée par la variation génétique au sein du gène MBL et son promoteur S pneumoniae a montré une liaison MBL faible à intermédiaire la capacité et les faibles taux sériques de MBL ont été associés à un risque accru de décès dû à la maladie pneumococcique . Cependant, des études antérieures de variation du gène MBL ont conduit à des résultats contradictoires en ce qui concerne la maladie invasive pneumococcique IPD susceptibilité [, -] Nous avons étudié la variation génétique dans un grand groupe d’enfants avec et sans IPD

PATIENTS ET MÉTHODES

Études de cas et contrôles

Les données nationales de surveillance de laboratoire sur les enfants avec IPD de juillet à novembre ont été obtenues à partir de la base de données du laboratoire national de référence Neisseria et Streptococcus, Statens Serum Institut SSI, Copenhague, Danemark . Isolats IPD des départements de microbiologie clinique à travers le pays, principalement des patients hospitalisés Les cas IPD ont été définis comme les enfants âgés de & lt; années chez lesquelles une culture positive de S pneumoniae du liquide céphalo-rachidien CSF, sang ou tout autre site normalement stérile a été obtenue Dans cette étude, seuls les patients avec des isolats obtenus à partir du LCR ou du sang ont été inclus. classifié comme méningite Les isolats étaient systématiquement sérotypés par latex pneumotest et réaction de Quellung à l’aide d’antisérums pneumococciques spécifiques de type SSI de SSI comme décrit précédemment SSI-Diagnostica, Copenhague, Danemark Les épisodes multiples ≥ IPD étaient définis comme l’isolement de S Pneumoniae du sang ou du LCR ≥ jours après culture initiale positive ou ≤ jours si l’infection récidivante était associée à un nouveau sérotype pneumococcique. Les caractéristiques démographiques ont été obtenues à partir du système danois d’enregistrement civil, qui est mis à jour quotidiennement et suit les changements démographiques des résidents danois, y compris la mort. l’hospitalisation a été obtenue auprès de l’autorité nationale danoise des patients ister Ce registre est mis à jour mensuellement et contient des informations sur tous les hospitalisations et les diagnostics de sortie de tous les patients traités dans les hôpitaux danois depuis janvier, ainsi que sur les contacts ambulatoires depuis janvier. Les cas d’hospitalisation préalable pour une cause quelconque ont été exclus afin d’exclure les enfants présentant une comorbidité sévère. Les contrôles ont été appariés selon le sexe et l’année de naissance. Nous avons utilisé la technique d’échantillonnage à risque, c.-à-d. Les sujets devaient être en vie et risquer une première hospitalisation avec IPD à la date d’admission du cas correspondant Pour les cas de méningite, nous avons identifié les contrôles par le SRC et exclu les personnes qui avaient déjà été admises à l’hôpital pour une raison quelconque. l’hospitalisation pour IPD Pour les cas de bactériémie, les contrôles ont été obtenus à partir du Danish Neonatal Screening Bioba nk DNSB en sélectionnant la carte de sang séché qui était adjacente au cas et pour le même sexe Pour minimiser les effets de la stratification de la population, les informations sur le lieu de naissance ont été obtenues à partir du CRS Seuls les cas et les témoins sont nés en Scandinavie Nous avons inclus des cas de méningite, de bactériémie et de témoins appariés selon l’âge et le sexe. Le vaccin antipneumococcique conjugué -valent a été introduit dans le programme danois d’immunisation des enfants. en octobre ; en avril, le VPC a été remplacé par le Vaccin conjugué valide VPC Le vaccin est gratuit et il est administré aux nourrissons âgés, et mois. Tous les cas de PI ont été signalés avant décembre.

Extraction d’ADN et génotypage

Les parents de tous les enfants nés au Danemark sont approchés de la participation de leurs nouveau-nés au programme de dépistage néonatal. Les échantillons sont stockés dans le DNSB Il a été démontré qu’un génotypage précis de l’ADN de WGA amplifié taches DBS, qui peuvent être stockées pendant des années Pour l’étude actuelle, l’extraction de l’ADN et l’amplification du génome a été effectuée par le Département de biochimie clinique à SSI, comme décrit précédemment. échantillon L’ADN génomique a été extrait à l’aide du kit Sigma-Aldrich d’Extract-N-Amp. Pour atténuer une possible amplification inégale des allèles, WGA a été réalisé en triplicat à l’aide du mini kit REPLI-g Qiagen et les trois amplifications ont été regroupées. allèle B, rs; allèle C, rs; et l’allèle D, rs et promoteur SNP rs dans le gène MBL ont été génotypésPour exons SNP, l’allèle de type sauvage est noté A Les SNPS des allèles B, C et D sont regroupés et donné la désignation “O”, qui est sauvage un haplotype de type combiné avec SNP dans B, C ou D est noté A / O Homozygotie et hétérozygotie composée sont notés O / O YO / YO Les SNP promoteurs sont exprimés en X / Y Les polymorphismes en exon sont toujours présents sur un promoteur Y Contexte La combinaison du SNP promoteur avec les allèles A et O donne des paires d’haplotypes diplotypes Une vue d’ensemble des diplotypes est fournie en Figure Les diplotypes fonctionnels sont connus pour correspondre aux concentrations sériques MBL et peuvent être divisés en groupes suivants: YA / YA, YA / XA, intermédiaire XA / XA, YA / YO et déficient XA / YO, YO / YO Figure Vue largeDownload slideAperçu de la construction des diplotypes et des fréquences des diplotypes dans le groupe combiné Construction des diplotypes: la variante structurelle allèles B, C, et D en exon sont mis en commun un ND notée “O” Conséquence inférée pour l’expression de la protéine MBL: gris clair, normal; gris, intermédiaire; gris foncé, défectueux Pour les fréquences de diplotypes%: caractères gras, cas de bactériémies de la méningite; italique, contrôle de la méningite bactériémieFigure View largeTélécharger diapos Aperçu de la construction des diplotypes et des fréquences diplotypes dans le groupe combiné Construction des diplotypes: les allèles structuraux B, C et D dans l’exon sont regroupés et notés “O” Conséquence inférée de l’expression de la protéine MBL: lumière gris, normal; gris, intermédiaire; gris foncé, défectueux Pour les fréquences de diplotypes%: caractères gras, cas de bactériémies de la méningite; italique, contrôle de la méningite bactériémieLe génotypage du SNP a été réalisé par LGC Genomics Teddington, Middlesex, Royaume-Uni, en utilisant une réaction en chaîne de la polymérase spécifique à un allèle compétitif

Analyses statistiques

La fréquence médiane et interquartile des variables quantitatives a été calculée Les fréquences des SNP dans chaque groupe ont été comparées à l’aide de χ statistiques Une régression logistique a été réalisée pour examiner les associations possibles entre diplotypes MBL et risque IPD, résultat et distribution des sérotypes après ajustement pour le sexe. en tant que rapports de cotes ajustés avec des intervalles de confiance en% IC L’équilibre de génotype a été testé en utilisant la méthode de Hardy-Weinberg Le niveau de signification a été fixé à P & lt; en raison de l’ajustement selon la méthode de Bonferroni L’analyse statistique a été effectuée en utilisant la version SAS de Statistical Analysis Systems, SAS, Cary, NC, USA L’étude a été approuvée par le Danish Data Protection Agency L’autorisation éthique a été obtenue du Comité d’éthique de la Danemark Selon la législation danoise, le Comité d’éthique de la recherche peut accorder une dérogation pour l’obtention d’un consentement éclairé pour des projets de recherche basés sur du matériel biologique dans certaines circonstances, et pour cette étude une telle exemption a été accordée

RÉSULTATS

Sujets

Au cours de la période d’étude, des cas de PI chez des enfants danois ont été enregistrés; La population de l’étude sur la méningite comprenait des cas et des témoins, et la population de l’étude de bactériémie comprenait des cas et des contrôles. Dix témoins ont été exclus en raison de la mauvaise qualité de l’ADN. % Diplotypes ont été construits pour les individus Tableau Tableau des caractéristiques des cas et des contrôles et aperçu des haplotypes Caractéristique YA% XA% YB% YC% YD% Bactériémie totale Cas Mâle:% Âge moyen à l’infection, mois: SD Contrôles Homme :% Total Mâle:% Méningite Cas Mâle:% Âge moyen à l’infection, mois: SD Contrôles Mâle:% Total Mâle:% Caractéristique YA% XA% YB% YC% YD% Total Bactériémie Cas Mâle:% Âge moyen à l’infection, mois: SD Contrôles Mâle:% Total Mâle:% Méningite Cas Mâle:% Âge moyen à l’infection, mois: SD Contrôles Mâle:% Total Mâle:% Abréviation: SD, déviation standardCases et témoins bien appariés pour l’année de la naissance et du sexe Tableau Il y avait une prédominance des hommes Les patients atteints de méningite étaient légèrement plus jeunes, âge moyen, mois; IQR, – mois que les patients avec bactériémie âge médian, mois; IQR, – mois; P & lt; Nous n’avons trouvé aucune différence dans la distribution des diplotypes selon les cas normaux, intermédiaires ou défectueux et les cas de méningite ou de bactériémie lorsque les cas et les témoins ont été comparés. Les fréquences génotypiques des cas et des témoins étaient en équilibre Hardy-Weinberg HWE, comme la signification de Bonferroni ajustée le niveau a été fixé à P & lt; rs [allèle B] pour les cas P = et les contrôles P =; rs [allèle C] P = pour les cas et P = pour les contrôles; rs [allèle D] P = pour les cas et P = pour les contrôles; rs [X / Y] cas P = et contrôles P =

Cas primaires IPD

Tableau Nous avons constaté que les personnes ayant un diplotype MBL défectueux n’étaient pas plus à risque de méningite ou de bactériémie que les personnes ayant un diplotype intermédiaire et normal. Aucune association significative avec IPD n’a été trouvée. lorsque nous avons répété les analyses afin de tester l’haplotype YO / YO défectueux vs tous les diplotypes restants OR, [% CI, -] pour la méningite et OR, [% CI, -] pour bactériémie et diplotypes normaux comparés aux diplotypes défectueux OR, [ % CI, -] pour la méningite et OR, [% CI, -] pour la bactériémie Dans ces analyses, les génotypes ont été regroupés comme dans les études précédentes [,,] Tableau Diplômes MBL chez les enfants atteints de pneumococcie invasive et en statut de groupe témoin , YA / YA, XA / YA% Diplômes intermédiaires, XA / XA, YA / YO% Diplotypes défectueux, XA / YO, YO / YO% Total% P Valuea Rapport de cotes% Confiance Intervalb Méningite C Ontrol – Contrôle des cas bactériens – Contrôle combiné des cas – Statut du groupe de cas Diplômes normaux, YA / YA, XA / YA% Diplômes intermédiaires, XA / XA, YA / YO% Diplotypes défectueux, XA / YO, YO / YO% Total% P Valuea Rapport des chances% Confiance Intervalb Contrôle de la méningite – Contrôle des cas bactériens – Cas Combiné Contrôle – Cas a × χ test, degrés de liberté = b Comparaison des diplotypes défectueux vs intermédiaires combinés avec des diplotypes normaux et ajustés pour le sexeNous n’avons trouvé aucun risque accru de PI associé avec diplotypes défectueux chez les patients âgés de – mois OR, [% IC, -] pour la méningite et OR, [% IC, -] pour la bactériémie

Cas IPD récurrents

Douze personnes atteintes de bactériémie ont eu plusieurs épisodes IPD Onze de ces cas ont eu des épisodes de PI et des cas ont eu des épisodes Parmi ces individus,% avaient un diplotype défectueux YO / YO par rapport à% parmi les témoins Aucune des personnes ayant plusieurs infections étaient XA / YO Quatre cas % avaient un diplotype intermédiaire comparé à% des contrôles Les individus avec IPD récurrente n’avaient pas de différence significative dans les fréquences de diplotypes comparés aux cas avec un seul épisode de PI IP; % CI, – et avec des contrôles OU,; % CI, –

Distribution de sérotypes pneumococciques et diplômes MBL

Les sérotypes capsulaires étaient disponibles pour les cas IPD% Le sérotype était le sérotype le plus fréquent et représentait environ% des infections Dix sérotypes, B, C, F, F, F, A, V, et représentaient% des cas avec IPD Tous les sérotypes sont couverts par le PCV actuellement utilisé La distribution du sérotype ne diffère pas pour les cas avec un diplotype MBL normal, intermédiaire ou défectueux Tableau Tableau donne un aperçu des sérotypes les plus fréquents selon les diplotypes Tableau Distribution des sérotypes les plus fréquents selon Diplotypes Sérotype YO / YO, XA / YO:% XA / XA défectueux, YA / YO: Intermédiaire% YA / YA, YA / XA: Normal% Total B F C F A F V Sérotype YO / YO, XA / YO:% défectueux XA / XA, YA / YO: Intermédiaire% YA / YA, YA / XA: Normal% Total B F C F A F V

Mortalité et Diplômes MBL

Cinquante-quatre patients sont décédés au cours de la première année après le diagnostic de PI. Quinze patients atteints de méningite et de bactériémie sont décédés durant les premiers jours. Les diplotypes MBL défectueux n’étaient pas associés à une mortalité accrue dans les cas de méningite. % IC, – ou dans les cas de bactériémie OU; % CI, – comparé aux cas avec diplotype normal

DISCUSSION

À notre connaissance, notre étude est la plus importante à ce jour de carence en MBL et de susceptibilité aux IPD chez les enfants. Nos résultats ont montré que la variation génétique dans le gène MBL n’a pas affecté la susceptibilité. En outre, il n’y avait pas d’association entre la variation du gène MBL et la distribution du sérotype pneumococcique ou entre la variation du gène MBL et la mortalité associée à l’IPD. La plupart des individus présentant des polymorphismes de la MBL gène et son promoteur semblent asymptomatiques, probablement en raison de la redondance du système immunitaire Une sensibilité accrue à l’infection est généralement observée chez les personnes présentant un déficit en MBL lorsque d’autres facteurs concomitants compromettent le système immunitaire . l’infection diffère de notre étude dans plusieurs aspects importants Deux études ont été menées chez des adultes et ont rapporté que l’homozygotie pour les polymorphismes MBL doublait le risque d’IPD et que MBL diplotype YO / YO était associé à un risque accru de méningite pneumococcique chez les adultes Dans une étude des infections respiratoires de différentes étiologies chez l’enfant de l’Ouest du Groenland, Koch et Melbye ont constaté que la carence en MBL chez les enfants âgés de plusieurs mois les exposait à un risque accru d’infection Nous n’avons pas trouvé de résultats similaires dans notre série de cas IPD. sont exposés à un risque accru d’infection Il reste possible que l’effet de la déficience en MBL ne se manifeste que dans le contexte d’immunodéficience concomitante , par exemple, chez les individus présentant une immunodéficience variable commune dans lequel l’infection à S pneumoniae est une cause fréquente de mortalité et de morbidité, ce qui suggère que la MBL ne joue pas un rôle essentiel rôle dans la défense immunitaire contre IPD parce que ces polymorphismes ont évité la sélection négative Des résultats antérieurs suggèrent que MBL ne joue pas un rôle significatif dans l’opsonisation et la phagocytose de S pneumoniae , et les données d’une étude de souris MBL-déficientes La fréquence des variants du diplotype MBL dans les cas et les témoins de notre étude correspondait bien aux distributions précédemment décrites dans la population danoise Une limitation potentielle dans notre étude. Certains de ces enfants pourraient avoir des immunodéficiences non identifiées ou d’autres maladies chroniques qui n’avaient pas été diagnostiquées au moment de l’IPD. Nous supposons que nos sujets d’étude sont d’origine nord-européenne, d’après les informations sur le lieu de naissance. des sujets et de leurs parents Cependant, nous ne connaissons pas leur origine ethnique, même s’il est fort probable que le v La majorité des sujets sont blancs, ceci est une limitation potentielle Tous les SNP sont dans HWE et ne suggèrent donc pas l’hétérogénéité ethnique A notre connaissance, nous avons mené la plus grande étude à ce jour sur les SNP MBL chez des enfants auparavant en bonne santé et leur sexe et âge. contrôles de la population générale, et nous n’avons trouvé aucune association avec IPD

Remarques

Remerciements Nous remercions Peter Garred pour son aide à l’interprétation des génotypes. TB a fourni le concept d’étude ZBH, MN, MVH, HTS et TB a conçu l’étude MVH, DMH et TB a effectué les expériences LFL, LNC et TB a analysé les données coordonnées. le système national de surveillance ZBH, MVH et HBK a identifié et recueilli des échantillons LFL et TB ont écrit la première ébauche du manuscrit Tous les auteurs ont participé à la rédaction du manuscrit final Soutien financier Ce travail a été soutenu par la Fondation Lundbeck; la Fondation Novo Nordisk; la King Christian Th e Foundation; la Fondation Jacob Madsen; le TrygVesta, la Fondation d’Ebba Celinder; la Fondation de l’Association médicale danoise; la Fondation pour l’avancement des sciences médicales; la Fondation Augustinus; la Fondation Peder Laurits Pedersen; la Fondation A P Møller pour l’avancement des sciences médicales; le Conseil danois de recherches médicales, la Fondation Preben et Anna Simonsen; la Fondation Ferdinand et Ellen Hindsgaul; la Fondation Hartmann; et le Dagmar Marshalls Fond LFL a été soutenu par une bourse de doctorat de l’Université de Copenhague Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: Aucun conflit signaléTous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits d’intérêts potentiels Conflits que les éditeurs considèrent pertinents pour le contenu de la manuscrit ont été divulgués