Présence de virémie chez les patients atteints de gingivostomatite herpétique primaire

Contexte La présence de virémie au cours des infections primaires au virus herpès simplex a déjà été étudiée, mais les résultats pour les personnes immunocompétentes n’ont été que rarement rapportés acheter un produit. Méthodologies En utilisant la PCR, nous avons évalué des échantillons de sang prélevés chez des enfants atteints de gingivostomatite herpétique. Résultats des tests sérologiques pour le type HSV étaient positifs pour les sujets%, limite pour%, et négatif pour% Résultats des PCR des échantillons de sang périphérique étaient positifs pour les sujets% Temps de début de la maladie La médiane, h et était plus longue pour les sujets avec des résultats positifs des tests sérologiques P = et plus court pour les sujets avec des résultats PCR positifs P = Aucun cas avec des résultats positifs de PCR et des tests sérologiques ont été trouvésConclusion PCR détecté virémie en% de patients atteints de gingivostomatite herpétique primaire Présence de virémie un peut jouer un rôle potentiel dans la dissémination virale, en fournissant une meilleure compréhension de la pathogenèse des infections à VHS, en particulier du système nerveux central

Le virus de l’herpès simplex HSV a pris une grande importance pour les cliniciens Outre sa présence omniprésente chez la grande majorité des humains, il est souvent associé à des récurrences périodiques de l’infection entre de longues périodes de latence Le mécanisme de ce phénomène reste obscur Elle n’a pas été résolue Bien que le VHS ait été détecté dans le sang périphérique de patients immunodéprimés et de nouveau-nés , la mesure dans laquelle il peut être présent dans le sang La plupart des chercheurs n’ont pas réussi à détecter la virémie chez l’hôte sain présentant une infection herpétique primaire , en partie à cause des méthodes disponibles pour l’identification des virus. L’objectif de la présente étude était d’évaluer la étendue de la virémie chez les patients pédiatriques atteints de gingivostomatite à HSV primaire utilisant un ghly technique d’amplification d’ADN sensible

Matériel et méthodes

Patients Tous les enfants hospitalisés pour un diagnostic clinique de gingivostomatite herpétique entre juin et août ont été inclus dans l’étude. Âge, sexe et temps écoulé depuis le début de la maladie, déterminé par le début de la fièvre, la salivation et le refus de boire. Le sang a été prélevé et le sang a été prélevé pour une numération globulaire complète et un test sérologique pour HSV. Prélèvement et culture pour HSV. Un coton-tige a été frotté sur les lésions buccales, placé en mL de milieu de transport et envoyé immédiatement après Conservation au laboratoire central de virologie du Centre Médical Chaim Sheba Tel Aviv, Israël Les écouvillons ont été inoculés dans une culture cellulaire Vero et A prétraitée avec du – dexaméthazone Après incubation à ° C pendant h, le milieu a été remplacé avec du milieu essentiel minimal de Eagle frais additionné d’acides aminés non essentiels MEM-NAA contenant du sérum foetal de veau% Lorsque l’on observe un effet cytopathique, la cellule Tous les isolats ont été typés par des anticorps monoclonaux conjugués de fluorescence Syva Microtak HSV- et HSV-, conformément aux instructions du fabricant. Immunofunorescence indirecte contre l’antigène membranaire. Baby hamster rein BHK / cellules infectées par HSV. type HSV-; Les cellules ont été lavées fois, et des gouttes en suspension contenant des cellules ont été placées sur des lames de verre, séchées pendant la nuit, et utilisées après conservation à – ° C. Trente microlitres d’une dilution des sérums: – : pour IgG ont été ajoutés aux cellules infectées Les cellules ont été incubées pendant min à ° C, lavées dans une solution saline tamponnée au phosphate pendant min, et traitées avec anti-humaine IgG Dako conjugué à la fluorescéine pour min. Ils ont ensuite été lavés à nouveau examiné avec un grossissement de microscope à fluorescence Zeiss ×, équipé d’une lampe au mercure-watt Les échantillons PCR ont été traités avec un test PCR interne niché, et ceux avec des résultats positifs ont été retestés en utilisant la procédure en temps réel. les échantillons ont été étudiés; μL de sang total ou de plasma ont été prélevés pour l’extraction de l’ADN DNA Mini Kit; Amorces PCR Qiagen Les amorces PCR étaient dirigées contre la glycoprotéine D du HSV ou le gène de la glycoprotéine GGG Au cours du premier cycle d’amplification, la PCR a été réalisée dans des microtubes de polypropylène en utilisant un mini-cycleur MJ Research. , contenant mmol / L pH Tris-HCl, mmol / L KCl, – mmol / L MgCl,% poids / volume gélatine, μmol / L de chaque dNTP, – unités d’AmpliTaq Gold Perkin Elmer; Roche, et les amorces externes Applied Biosystems; ABI Dix microlitres d’ADN extrait d’échantillon ont été ajoutés au tube réactionnel. Le cycle de PCR initial était le suivant: ° C pour min, ° C pour s et ° C pour s Les cycles restants étaient les mêmes, sauf que l’incubation en ° C était raccourci à s, et pendant le dernier cycle, l’étape ° C a été étendue à min Le second cycle de cycles d’amplification a été effectué comme décrit, sauf que μL du produit du premier tour a été ajouté au lieu de μL d’ADN purifié, et pmol de les amorces internes ABI ont été ajoutées à la place des amorces externes La séparation électrophorétique des produits PCR a été réalisée après amplification La sensibilité de la PCR nichée est des copiesReal time PCR-TaqMan Les amorces et sondes ont été dirigées sur les gènes gG et gG de la glycoprotéine HSV sonde, qui se composait d’un oligonucléotide avec un colorant rapporteur fluorescent-FAM, a été liée de manière covalente à la ‘extrémité de l’oligonucléotide et un extincteur TAMRA, typiquement situé à la fin de la PCR, des amorces sens et antisens hybridées à des séquences spécifiques de l’ADN cible Elles se sont hybridées à une séquence cible dans le produit de PCRLe PCR a été réalisé dans des tubes / une plaque avec le système de détection ABI PRISM Sequence. Le volume d’incubation total était de μL, contenant amorces inverses, et une sonde ABI Cinq microlitres d’ADN purifié ont été ajoutés à chaque réaction. Dans la première étape, le cycle de PCR a été effectué à ° C pour une course minimale; dans la deuxième étape, à ° C pour la course min; et dans la troisième étape, à ° C pour s et ° C pour s cycles en cours La sensibilité de la PCR TaqMan est des copies ~- Threshold Cycle-CT La quantité de cible dans les échantillons inconnus a été quantifiée en mesurant CT et en utilisant le Courbe standard pour déterminer le nombre de copies de départ Tous les calculs ont été effectués à l’aide du logiciel système Analyse statistique ABIS Les données ont été analysées avec le logiciel BMDP Les variables continues ont été comparées par analyse de variance et les variables discrètes analysées par Pearson.

Résultats

Trente-deux enfants avec un diagnostic clinique de gingivostomatite ont participé à l’étude; Les patients étaient exclus en raison de l’absence d’isolement du VHS des cultures orales. Les garçons et les filles âgés de – mois âge médian, mois L’intervalle entre l’apparition des symptômes et la collecte des échantillons variait de h à l’intervalle médian h Les numérations globulaires étaient normales pour tous les patients sauf un, qui avaient un nombre absolu de neutrophiles neutrophiles / mm à l’admission, qui a ensuite été éliminé spontanément HSV- a été isolé des lésions buccales dans tous les cas. Les résultats des tests sérologiques pour HSV étaient positifs. patients, titre d’IgG négatif, & lt ;: chez les patients%, et titre d’IgG limite, ⩽: chez les patients%; P = tableau Le temps écoulé entre l’apparition des symptômes et la collecte des échantillons était plus long chez les patients dont le test sérologique était positif pour le VHS que chez ceux dont les résultats des tests sérologiques étaient négatifs ou limites. P =

Tableau View largeDownload slideCaractéristiques des patients atteints de gingivostomatite herpétique primaire, par les résultats de tests sérologiquesTable View largeTélécharger slideCaractéristiques des patients atteints de gingivostomatite herpétique primaire, par les résultats des tests sérologiquesPCR des échantillons de sang total était positif pour HSV- pour les patients%; chez ces patients, les résultats étaient également positifs pour la PCR des échantillons plasmatiques par des méthodes internes imbriquées et en temps réel. La PCR était négative pour le HSV HSV- dans tous les cas examinés Aucune association n’a été trouvée entre l’âge et les résultats PCR positifs. le délai entre l’apparition des symptômes et la collecte des échantillons était plus court pour les patients avec des résultats PCR positifs que pour ceux avec des résultats PCR négatifs, bien que la différence entre les groupes n’était pas statistiquement significative. table

Tableau View largeDownload slideCaractéristiques des patients atteints de gingivo-stomatite herpétique primaire, par PCRTable View largeTélécharger slideCaractéristiques des patients atteints de gingivo-stomatite herpétique primaire, par PCR

Tableau View largeDownload slideAssociation entre la PCR et les résultats sérologiques chez les patients atteints de gingivostomatite herpétique primaireTable View largeTélécharger la diapositiveAssociation entre la PCR et les résultats sérologiques chez les patients atteints de gingivo-stomatite herpétique primaire

Discussion

ood a été rapporté seulement chez les patients avec des conditions ou des facteurs de risque qui peuvent les prédisposer à une infection disséminée: nouveau-nés, patients en oncologie, et receveurs de greffe , également associés à la grossesse , malnutrition , alcoolisme , Le taux élevé de virémie dans notre étude, par opposition à celui des études précédentes, peut s’expliquer par notre utilisation de la PCR, une méthode plus sensible et plus rapide que la culture tissulaire pour la détection du VHS [ En outre, des études in vitro ont montré que le HSV peut être présent dans les cellules sanguines périphériques dans un état non productif, ce qui peut expliquer les résultats négatifs de la culture virale Nos résultats sont corroborés par des études PCR antérieures. et al ont rapporté l’ADN du VHS dans des échantillons de sang prélevés chez des patients atteints d’herpès labial récidivant aigu, comparativement à aucun patient au stade convalescent de l’infection. En outre, Youssef et al ont détecté l’ADN du VHS dans des échantillons sériques prélevés chez des patients atteints d’herpès labial récurrent aigu. La présence de virémie au cours des récidives augmente la probabilité de sa présence au cours des récidives. L’intervalle le plus court trouvé dans la présente étude entre l’apparition des symptômes et la collecte des échantillons chez les patients avec des résultats de PCR positifs indique que la présence de l’ADN du VHS dans le sang est un phénomène transitoire, limité L’absence d’association entre les résultats positifs des tests sérologiques, qui est un phénomène tardif, et les résultats positifs de la PCR. La récupération du VHS à partir d’échantillons de sang total soulève la question de savoir si le virus circule librement ou association avec des cellules sanguines L’échec jusqu’à présent pour isoler HSV Le Brice et al ont extrait l’ADN des PBMCs, mais la récupération du HSV chez les patients leucopéniques indique que le virus n’est pas exclusivement transporté par les globules blancs. la concentration de HSV dans le sang était associée aux plaquettes plutôt qu’aux leucocytes . Sur cette base, les auteurs supposent que les plaquettes jouent un rôle dans la dissémination hématogène du VHS ; Cela peut expliquer notre détection de l’ADN du VHS dans le plasma L’apparition de la virémie au cours de la gingivostomatite herpétique primaire est importante pour la compréhension de la pathogenèse des infections herpétiques. Le mécanisme sous-tendant les récidives périodiques du VHS n’est pas entièrement compris. neurolganglia qui innervent des parties de la peau initialement impliquées dans l’infection Avec des stimuli appropriés, le HSV latent est réactivé et descend les éléments neuraux des ganglions vers la zone de la peau innervée Comment le virus atteint les ganglions régionaux après l’infection primaire La maladie est inconnue dans la peau et les muqueuses, mais la dissémination hématogène n’est probablement pas la réponse.La pathogenèse de l’encéphalite à HSV chez les nouveau-nés, l’encéphalite est causée par la dissémination hématogène du VHS et du VHS. Les enfants et les jeunes adultes peuvent contracter l’encéphalite. une infection primaire lorsque le virus est ac Dans d’autres cas, l’encéphalite peut résulter d’une réinfection avec une autre souche de HSV- Cependant, la plupart des cas sont dus à la réactivation par le HSV d’une infection sécrétée par le SNC depuis longtemps, le mécanisme de la sécrétion neurotropique. Les études d’hybridation de l’ADN ont révélé l’ADN du VHS dans le tissu cérébral obtenu à l’autopsie, même chez des adultes sains . La présence de virémie au cours de l’infection primaire peut expliquer comment le virus pourrait atteindre le tissu cérébral, servant ainsi plus tard de source d’encéphalite. La méningite aseptique récurrente ou la méningite à Mollaret est une autre maladie du SNC avec un lien probable avec le HSV. précédant la virémie La vulvovaginite herpétique primaire, qui est causée par le VHS et parfois par le VHS, s’accompagne de eningite dans% -% des cas Bien que jamais signalé, la virémie pendant l’infection pourrait fournir un mécanisme pathogénique raisonnable La possibilité de virémie au cours des infections hépatiques primaires peut également avoir des implications pratiques, comme la sensibilisation à la transmission virale par le sang. étude, la PCR a démontré la présence de virémie chez% des patients immunocompétents atteints de HSV-gingivostomatite primaire. Nos résultats peuvent fournir une meilleure compréhension de la pathogenèse des infections herpétiques.

Remerciements

Conflit d’intérêts Tous les auteurs: Pas de conflit