Détection de niveaux élevés de β-chimiokine sérique chez des individus chinois séronégatifs exposés au virus de l’immunodéficience humaine

Les mutations dans la région codante du CCR, telles que CCRΔ et CCRm, qui suppriment la transmission du virus VIH du virus de l’immunodéficience humaine n’existent pas chez les Chinois. Cependant, les sujets chinois à Taïwan ayant des antécédents d’exposition sexuelle multiple au VIH restent non infectés. Les expériences ont donc été conçues pour étudier le mécanisme immunitaire qui protège cette cohorte contre l’infection par le VIH. Des échantillons sanguins périphériques de ces sujets et des personnes en bonne santé qui n’avaient pas été exposées au VIH ont été obtenus pour la quantification des niveaux de β- Sérum significativement plus élevé pour presque toutes les β-chimiokines, régulation de l’activation, expression et sécrétion des lymphocytes T normaux, protéine inflammatoire des macrophages MIP-α et MIP-β P & lt ; , P & lt; et P =, respectivement, mais pas IL-, ont été détectés chez les sujets non infectés par le VIH par rapport aux sujets témoins. Le résultat suggère que parmi les gènes hôtes et les facteurs cellulaires identifiés jusqu’à présent, les β-chimiokines sont les principaux facteurs suppresseurs du VIH qui protègent les Chinois contre l’infection par le VIH

Il a été démontré que de nombreux facteurs génétiques et cellulaires, principalement liés au récepteur CC-chimiokine CCR, influencent la pathogenèse du VIH de type VIH- CCRΔ et CCRm sont des allèles mutants génétiques identifiés jusqu’ici pour inhiber l’infection par le VIH L’allèle CCRΔ est très commun dans les populations blanches [-,,], mais aucun allèle n’a été rapporté chez les personnes d’ascendance africaine et asiatique, y compris les chinois à Taiwan [,, -] L’allèle CCRm une mutation non-sens au nucléotide Physiologiquement, le RCC, qui est présent à la surface de diverses cellules sanguines, se lie aux β-chimiokines CC, y compris la régulation de l’activation, les RANTES normales exprimées et sécrétées par les lymphocytes T, les macrophages inflammatoires. protéine MIP-α, et MIP-β, puis induit une transduction de signal intracellulaire pour l’activation des cellules à répondre aux inflammations tissulaires examinées dans Lustre Ces β-chimiokines ont été montré pour supprimer l’entrée ou fu Il semble que ces protéines sont des composants solubles majeurs, jusqu’ici isolés cliniquement, sécrétés principalement par des cellules CD qui inhibent la transmission de R. Souches VIH Contrairement aux β-chimiokines, l’IL précédemment appelé «facteur chimioattractif lymphocytaire» inhibe la réplication du VIH au niveau transcriptionnel in vitro, même s’il s’agit du ligand de la molécule CD Cliniquement, des taux élevés d’IL ont été détectés Les études précédentes sur les épidémies ont démontré que les allèles CCRΔ et CCRm suppresseurs du VIH n’existent pas dans les cellules T clonées provenant de patients présentant une infection à VIH non progressive à long terme. dans la population chinoise Néanmoins, les sujets ethniquement chinois à Taiwan, qui ont eu de longs antécédents d’expositions multiples à haut risque au virus par le biais d’activités sexuelles Cette observation suggère que certains facteurs anti-VIH existaient dans cette cohorte et qu’ils peuvent être identiques ou non aux facteurs déjà rapportés dans d’autres groupes ethniques. Des expériences ont donc été conçues pour enquêter systématiquement sur le VIH. mécanisme immunitaire qui peut les protéger contre l’infection par le VIH Cet article rapporte le résultat sur la quantification des niveaux de RANTES, MIP-α, MIP-β et IL- dans les échantillons sériques ou sécrétés par les lymphocytes du sang périphérique PBL dérivés du VIH Sujets non infectés Des niveaux significativement plus élevés pour presque toutes les β-chimiokines sériques ont été trouvés dans la cohorte par rapport aux membres du groupe témoin, suggérant que ces cytokines chimiotactiques, mais pas IL-, sont les principaux facteurs inhibiteurs du VIH chez les Chinois

Patients et méthodes

Sujets et plan d’étude De juin à juin, les Chinois séronégatifs exposés au VIH à Taïwan ont été identifiés par leur partenaire sexuel infecté par le VIH. Les critères d’inclusion dans l’étude étaient les suivants: non infecté par le VIH, diagnostiqué par EIA et Western Blot, et libre de toute maladie vénérienne; a eu des relations sexuelles à risque élevé au moins une fois par semaine avec des partenaires séropositifs au VIH pour & gt; an; et exprimé sa volonté de participer à cette étude. Les informations sur l’âge, le sexe et l’engagement dans les activités sexuelles pour ces sujets non infectés par le VIH sont résumées dans le tableau également inclus dans le groupe témoin, les personnes en bonne santé n’ayant pas été exposées au VIH. , et qui vivaient à proximité ou étaient parents des membres de la cohorte étudiée; les sujets témoins ont été appariés pour l’âge et le sexe

Tableau View largeTélécharger slideCaractéristiques des individus séronégatifs exposés au VIH et des membres du groupe témoin de l’étudeTableau Voir grandDisque de téléchargementCaractéristiques des individus séronégatifs exposés au VIH et des membres du groupe témoin de l’étudeTous les participants ont été testés à plusieurs reprises pour une infection par le VIH. Kit VIH-EIA; Mures Biotech, Western blot analysis Nouveau kit LAV Blot I; Sanofi Diagnostics Pasteur, et une méthode PCR diagnostique qui a été décrite ailleurs En parallèle, une petite portion de sang total frais de tous les sujets a été soumise à un comptage sanguin complet effectué à la Section d’hématologie, Département de pathologie, National Cheng Hôpital universitaire de Kung Tainan, Taïwan Après avoir confirmé le statut VIH négatif des tests, les patients ont été invités à donner des mL de sang périphérique pour les procédures suivantes: extraire l’ADN pour le génotypage de CCRΔ et CCRm; isoler les échantillons de sérum pour la mesure ELISA des taux de β-chimiokines et d’IL-; et pour obtenir des PBL pour la quantification de β-chimiokines sécrétées par des cellules et de la quantification par IL de cytokines chimiotactiques. Dix millilitres de sang frais qui ont été recueillis & lt; Des échantillons de sérum ont été obtenus par centrifugation du sang coagulé puis conservés en aliquots à – ° C jusqu’à leur utilisation. Les cellules mononucléaires du sang périphérique ont été obtenues par la méthode de centrifugation Ficoll-paque Pharmacia Biotech. protocole fourni par le fabricant et maintenu ultérieurement dans des boîtes de culture contenant du milieu RPMI additionné de% de sérum fœtal bovin, U / mL de pénicilline et de μg / mL de streptomycine tous les réactifs de culture tissulaire utilisés dans cette étude ont été achetés auprès de Gibco BRL. Plats culturels, les suspensions de PBL ont été isolées Une petite portion de PBL a ensuite été colorée par coloration polychrome Wright et examinée au microscope pour la confirmation morphologique des lymphocytes Approximativement × PBL, en duplications, ont ensuite été transformés en aliquotes et maintenus dans le même milieu , avec ou sans μg / mL de phytohémagglutinine PHA et mM phorbol -myristate – Les surnageants des cellules culturelles ont ensuite été transformés en aliquotes et stockés à-° C ou directement utilisés dans la détermination de la concentration des β-chimiokines et de l’IL-Pour la quantification du sérum et des kits ELISA commerciaux RANTES, MIP-a et IL- sécrétés par des cellules ont été achetés chez Endogen; les réactifs ELISA MIP-β ont été obtenus à partir de systèmes R & D. Selon les fournisseurs, les plages de détection pour RANTES, MIP-α, MIP-β et IL- étaient

Résultats

Caractéristiques des sujets étudiés et examens de laboratoire de base A Taiwan, le VIH est prévalent dans de nombreux groupes homosexuels et parmi ces groupes, nous avons identifié des hommes ayant des relations homosexuelles ou bisexuelles avec leur partenaire ou partenaire séropositif et susceptibles d’être exposés à Les femmes VIH-séronégatives de l’étude, testées par l’EIA, ont été contactées par le biais d’un processus d’entretien avec leurs conjoints séropositifs. Le statut non infecté par le VIH de ces hommes et des femmes infectées par le VIH. les femmes ont également été confirmées par l’utilisation du Western blot et des méthodes de PCR. Cette étude a également inclus des personnes en tant que groupe témoin; ils ont été examinés et se sont révélés exempts d’infection par le VIH au moyen des mêmes méthodes de test. Ils étaient parents de la cohorte étudiée ou vivaient à proximité, de sorte que les similitudes dans les antécédents génétiques et environnementaux pouvaient également être prises en compte lors de l’interprétation des résultats. de la collecte des échantillons sanguins, tous les participants étaient en bonne santé et ne se rappelaient pas avoir souffert de maladie, y compris le rhume, au moins un mois. De plus, des numérations sanguines complètes de routine ont été effectuées avec du sang entier frais; Le tableau résume les caractéristiques relatives à l’âge, au sexe et aux comportements sexuels de la cohorte non infectée par le VIH et des témoins. Détection des β-chimiokines et des IL- Nous avons ensuite déterminé les niveaux de RANTES, MIP-α, MIP-β et IL- dans les échantillons sériques ou les surnageants de PBL cultivés dérivés des groupes étudiés et témoins. Les quantités de RANTES dans les échantillons sériques de tous les participants se situaient dans le nanogramme par Les mesures, en général, ont montré que les concentrations de toutes les β-chimiokines, mais pas d’IL-, dans la plupart des échantillons de sérum isolés des individus non infectés par le VIH sont plus élevés que ceux isolés des contrôles En particulier, presque aucun dans le groupe témoin ne présentait de MIP-α sérique détectable, alors que la majorité des patients non infectés par le VIH présentaient evels des données factorielles non montréesTableau montre les moyennes du groupe de presque toutes les β-chimiokines sériques, mais pas les IL-, les taux pour la cohorte VIH-séronégative sont significativement plus élevés que ceux pour le groupe témoin P & lt; pour RANTES et MIP-α; P = pour MIP-β Ce résultat est en accord avec des rapports ailleurs , et l’effet anti-VIH documenté des β-chimiokines fournit une explication épidémiologique de la raison pour laquelle ces sujets chinois sont restés non infectés, même s’ils ont de longs antécédents de comportement sexuel à risque avec des partenaires séropositifs

Tableau View largeTélécharger la lameDétermination des taux de β-chimiokine et d’IL- dans la cohorte non infectée par le VIH et le groupe témoin, en utilisant ELISATable View largeDownload slideDétermination des taux de β-chimiokine et d’IL- dans la cohorte non infectée par le VIH et le groupe témoin, L’analyse de nos données préliminaires a indiqué que tous les niveaux de protéines et d’ARNm de RANTES, MIP-α, MIP-β et IL- ont été déterminés par l’utilisation d’ELISAWe. au moyen de PCR et de mesures ELISA par reverse-transcriptase, atteint les pics h après les traitements avec les mitogenes PMA et PHA non représentés Donc, et h ont été choisis comme temps de mesure de ces facteurs solubles sécrétés par les PBL non stimulés et stimulés, respectivement. que le MIP-α est un facteur inductible parce qu’il n’y a pas de PBL non stimulés, sauf pour l’échantillon isolé chez un participant Ce résultat est cohérent avec les observations rapportées par ailleurs L’analyse statistique subséquente sur les taux de β-chimiokines et de IL- sécrétés par les cellules non stimulées n’a révélé aucune différence significative entre les concentrations de MIP-α détectées. Cependant, les PBL non stimulés provenant de personnes non infectées par le VIH semblaient produire plus de β-chimiokines, mais pas d’IL-, que le groupe témoin. Sur induction avec PHA et PMA, les PBL stimulés produisaient des quantités plus importantes comme suit, moyenne: RANTES ~ -plier, MIP-α>, – pli, MIP-β ~-fois, et IL-pli, au tableau des surnageants culturels Dans les conditions expérimentales, seule la quantité moyenne de MIP-α produite par stimulation Les PBL de la cohorte infectée par le VIH se sont avérés présenter une quantité significativement plus grande que celle du groupe témoin P =; Lorsque les données sont rassemblées, nous avons conclu que la découverte significative de cette étude était la détection des taux élevés de RANTES, MIP-α et MIP-β sériques chez les sujets non infectés par le VIH, qui n’ont pas été détectés dans les membres du groupe témoin

Discussion

Jusqu’à présent, le facteur antiviral cellulaire CAF a été identifié comme un facteur qui répond parfaitement aux critères. En dépit de l’impossibilité de trouver CAF, de nombreux autres facteurs sériques ont été isolés et testés positifs pour les activités anti-VIH notamment les β-chimiokines RANTES, MIP- Comme la structure des protéines de la chimiokine dérivée des macrophages qui possède des propriétés anti-VIH est encore controversée , cette étude s’est concentrée sur les rôles de RANTES, MIP-α, MIP et MIP-β. -β, et IL- pour protéger la cohorte non infectée par le VIH de l’infection par le VIH Bien que la précision de la mesure des β-chimiokines sériques, en particulier pour RANTES, ait été mise en doute , les concentrations sériques des facteurs à ceux rapportés ailleurs [,,] Deux lignes de preuve dans cette étude suggèrent fortement que ces β-chimiokines sont les principaux facteurs suppresseurs du VIH qui protègent ces Chinois contre l’infection par le VIH. Le niveau de RANTES ± ng / mL dans le tableau détecté dans le groupe étudié correspondait aux niveaux observés chez les travailleurs de la santé exposés au VIH mais non infectés plusieurs mois après l’exposition au virus. Deuxièmement, des concentrations élevées de MIP-α sérique ont été Dans notre étude, nous avons observé que les membres de la cohorte non infectée par le VIH coïncidaient avec les taux élevés de MIP-α et de MIP, ce qui n’est pas le cas chez les sujets témoins non exposés au VIH. -β, suggérant qu’un mécanisme régulateur commun pour la production et la sécrétion de ces chimiokines existait chez ces patients Parce qu’il est largement admis que les β-chimiokines sont principalement produites par les lymphocytes T, en particulier par les cellules CD, nous avons mesuré les quantités de RANTES, MIP-α et MIP-β sécrétés aux surnageants culturels par des PBL dans lesquels un nombre substantiel de lymphocytes CD est contenu Encore une fois, le mécanisme de régulation commun pour les expressions basales de l’IM P-α et MIP-β ont pu être observés chez l’un des sujets étudiés dans le groupe témoin; Ses PBL ont produit les plus hauts niveaux pour les deux facteurs. Données non montrées Toutes les β-chimiokines analysées ici ont révélé des niveaux plus élevés dans les échantillons sériques provenant des patients chinois exposés au VIH mais non infectés par le VIH. seuls les niveaux significativement plus élevés de MIP-α sécrétés par les PBL stimulés étaient associés au tableau de cohorte étudié, suggérant que les PBL activés sécrètent physiologiquement la quantité prédominante du facteur dans la circulation. L’absence de corrélation entre les taux d’autres β-chimiokines dans Des échantillons sériques et des surnageants de PBL non stimulés ou stimulés dérivés des différents groupes peuvent être dus à une synthèse partielle des P-chimiokines par les PBL dans les conditions expérimentales. Cette hypothèse est étayée par le fait que les macrophages et les neutrophiles, et même les cellules endothéliales pas présent dans les PBL préparés, peut sécréter ces facteurs solubles dans distinguuisha D’autre part, cette étude n’a trouvé aucune corrélation dans les niveaux d’IL avec les groupes étudiés ou témoins, même si IL- est une cytokine anti-VIH puissante qui est sécrétée par les groupes étudiés ou témoins. CD, CD, cellules épithéliales bronchiques et éosinophiles [,,] En outre, IL- produit par la cohorte étudiée n’a pas atteint le microgramme par millilitre gammes requises pour tout effet antiviral appréciable , ce qui suggère que le facteur IL- ne joue pas rôle dans la protection de la cohorte chinoise contre l’infection par le VIH Enfin, aucune association des taux de β-chimiokines et d’IL- avec le sexe, l’âge ou la préférence sexuelle de la cohorte étudiée n’a été observée. Données non présentées Une autre cohorte qui a retenu notre attention est Les nourrissons non infectés par le VIH nés de mères séropositives Les deux facteurs héréditaires et l’immunité affectent le risque d’être infectés verticalement Contrairement au rôle de l’allèle CCRΔ dans la pathogenèse du VIH chez les adultes [ ,], les investigations cliniques ont donné des résultats controversés quant à savoir si l’allèle réduisait la transmission verticale du virus Cependant, chez les enfants non infectés ou infectés par le VIH, des taux plus élevés de β-chimiokines étaient associés à la prévention du VIH. Dans cette étude, nous n’avons pas évalué les facteurs qui affectent la transmission verticale du VIH aux nourrissons chinois à Taïwan. En résumé, ce laboratoire et d’autres ont étudié les nombreux facteurs génétiques et cellulaires. capable d’influencer la pathogenèse du VIH in vitro et in vivo Cette étude a révélé que, parmi ces facteurs, les grandes quantités de β-chimiokines sériques sont associées au phénotype résistant au VIH des sujets chinois, ce qui suggère que RANTES, MIP-α et MIP-β sont les principaux facteurs suppresseurs du VIH qui protègent les adultes chinois de l’infection par le VIH

Remerciements

Nous remercions tous les participants à cette étude et l’Association de défense des personnes vivant avec le VIH / SIDA de Taiwan et le Bureau de Kaohsiung de Living With Hope pour leur soutien enthousiaste à ce projet. Nous remercions également le Dr Larry K Steinrauf pour sa lecture critique de l’article. manuscrit, et Shu-Chuan Lu, Ming-Jen Chang, et tout le personnel des sections de banque du sang, biochimie clinique et hématologie, Département de pathologie, Hôpital national Cheng Kung Tainan, Taiwan, pour une assistance technique utile