Associations entre les sous-types de virus d’Epstein-Barr, les allèles de classe 1 d’antigène leucocytaire humain et le développement d’un syndrome lymphoprolifératif post-transplantation chez des receveurs de greffe de moelle osseuse

L’association entre le sous-type Epstein-Barr, l’antigène leucocytaire humain de classe I et le développement du syndrome lymphoprolifératif post-transplantionnel a été étudiée chez un groupe de receveurs de moelle osseuse. Une corrélation statistiquement significative a été observée entre l’antigène B des leucocytes humains et le développement de trouble lymphoprolifératif posttransplantation P = Cette étude fournit, à notre connaissance, la première preuve que l’allèle B de l’antigène leucocytaire humain pourrait prédisposer les receveurs de greffe de moelle osseuse au syndrome lymphoprolifératif post-transplantation associé au virus d’Epstein-Barr.

Virus Epstein-Barr L’EBV est un herpèsvirus tumorigène qui persiste à vie dans les lymphocytes B humains. Les lymphocytes T cytotoxiques spécifiques du virus sont critiques pour contrôler l’infection latente par EBV chez les individus sains. La réponse CTL la plus forte est dirigée contre les antigènes nucléaires EBV latents. En outre, il a été suggéré que le niveau et la spécificité de la réponse CTL sont fortement influencés par les allèles HLA de classe I de l’hôte Les transplantés sont à risque de développer un trouble lymphoprolifératif post-transplantation associé à l’EBV. en raison de l’absence d’une surveillance immunitaire compétente La fréquence globale de PTLD après avoir reçu une greffe de moelle osseuse allogénique BMT est ~% L’incidence la plus élevée se produit pendant les premiers mois après la transplantation Facteurs de risque, tels que non apparentés ou HLA-mésappariés les donneurs, la déplétion des cellules T, et le traitement prophylactique spécifique pour le rejet de greffe, augmentent clairement la fréquence des Cependant, on ne sait toujours pas dans quelle mesure des variants distincts de la souche EBV ou certains allèles HLA sont différentiellement associés au sous-typage PTLDIn EBV lié à l’EBV, l’attention a été concentrée sur les variations des gènes avec des fonctions oncogéniques connues ou présumées. ainsi que sur les variations des épitopes CTL Un des gènes les plus étudiés à cet égard est la protéine membranaire latente LMP, un proto-oncogène EBV. Quatre groupes LMP, appelés A à D, ont été classés Récemment, nous avons montré qu’au moins Les variants EBV de type I EBNA peuvent être identifiés parmi les isolats européens d’EBV, en plus du prototype B Le but de cette étude était d’examiner les associations potentielles entre les sous-types d’EBV, caractérisés par des variations de leurs gènes EBNA et LMP. types de molécules de classe I et développement de PTLDPatients, matériaux et méthodes Les patients ont été sélectionnés pour l’analyse selon les critères suivants: réception de BMT allogénique entre d au département d’hématologie, au centre médical de l’université Erasmus de Rotterdam Rotterdam, aux Pays-Bas, et à la réactivation de l’EBV pendant la période de suivi après la transplantation, avec une progression vers les niveaux de charge d’ADN EBV & gt; copies / mL dans le plasma, tel que détecté par un test PCR décrit précédemment Parmi ces patients, tous les individus ayant développé une PTLD associée à l’EBV dans l’année après la transplantation n = ont été inclus dans l’étude et les patients du groupe non-PTLD étaient aléatoirement choisi pour l’inclusion de l’étude Le diagnostic de PTLD associé à EBV a été réalisé comme décrit par van Esser et al en utilisant des résultats histologiques et / ou cytologiques selon les critères de Knowles et al Tous les échantillons de patients porteurs de souches EBV de type I le typage du variant EBNA, et le groupe LMP et les échantillons dans lesquels les souches EBV de type I ont pu être complètement caractérisées ont été inclus dans l’étude. Un total d’échantillons répondait à ces critères, incluant des échantillons de patients PTLD et des échantillons PTLD L’âge médian des patients de l’étude était de dix ans, tous les échantillons ont été obtenus entre et et ont été conservés à – ° C jusqu’à leur utilisation dans l’étude actuelle. ADN génomique viral w extrait des échantillons de plasma à l’aide d’un mini kit QIAamp Viral RNA Les souches Qiagen EBV ont été classées comme type I sur la base de la divergence de la séquence ADN dans les régions N-terminales de EBNAA et EBNAC du génome EBV Deux sites polymorphes de l’EBV le génome – le locus EBNA et le locus LMP – ont été choisis comme base pour l’attribution de sous-types. Des amplifications PCR et des analyses de séquences d’ADN ont été effectuées dans les régions N-terminales de EBNAA et EBNAC, dans les régions C-terminales de EBNAA et EBNAB hypervolémie. dans la région C-terminale de LMP en utilisant des amorces spécifiques du prototype B, comme décrit ailleurs Les séquences d’ADN résultantes ont été groupées selon la variante EBNA et le tableau des groupes LMP.

ses variantes, mais cette suggestion, bien sûr, nécessite une confirmation par une cohorte plus grande La fréquence de PTLD a également été comparée pour les groupes LMP distincts et pour les différentes variantes de groupe EBNA-LMP tableau des combinaisons Bien que certaines différences ont été trouvées entre les patients PTLD et les patients sans CTLD, aucune association statistiquement significative n’a pu être identifiée. Les CTL spécifiques à EBV sont restreints aux HLA, restreints pour contrôler l’infection par les EBV latentes et pour prévenir le développement des PTLD Évaluer une relation possible entre allèles HLA, souches EBV et développement de PTLD, Nous avons évalué la distribution des allèles HLA A et B dans cette cohorte. Ces données sont également présentées dans le tableau Tous les receveurs de BMT dont les données ont été analysées dans la présente étude étaient complètement apparentés ou non avec les donneurs, et le typage HLA était basé sur les résultats de l’analyse sérologique et séquentielle L’observation la plus frappante est que% des receveurs de BMT qui ont développé PT LD a exprimé un allèle HLA B, alors que l’allèle B n’était présent chez aucun des patients sans PTLD P =, par test exact de Fisher Nous avons ensuite étudié tous les patients porteurs d’un allèle HLA B dans la cohorte BMT ayant reçu une greffe pendant la période – Dans l’ensemble, les patients ont été identifiés comme portant un allèle HLA B; Parmi les patients restants,% ont développé des PTLD, alors qu’ils avaient soit une faible charge EBV soit aucune charge EBV pendant la première année après la réception d’une greffe Etant donné que la PTLD a été décrite comme se produisant dans ~% de patients après la réception d’une BMT , nos données indiquent une corrélation hautement significative entre l’allèle HLA B et PTLD et un risque élevé de développer PTLD pour les receveurs BMT abritant un allèle HLA B Bien que plusieurs marqueurs situés dans la région HLA classe I ont On a déjà trouvé que le lymphome hodgkinien EBV-positif était significativement associé , à notre connaissance, il s’agit du premier rapport montrant une association entre le complexe majeur d’histocompatibilité humain de classe I, molécule HLA B et EBV conduisant à PTLD. l’allèle a déjà été montré pour être significatif dans d’autres maladies On pense qu’il est le gène de susceptibilité à la maladie pour la maladie de Behcet et est également soupçonné d’être associé à une progression lente du SIDA D’intérêt, HLA B est une molécule à assemblage lent pour la présentation d’antigène et montre une affinité généralement faible pour les peptides Par conséquent, il semble possible que les individus avec HLA B présentent un EBV spécifique Réponse des CTL En plus d’un système immunitaire sévèrement compromis chez les receveurs de BMT, la présence de HLA B pourrait faciliter la prolifération incontrôlée des cellules B infectées par EBV. Ces données nous ont conduit à dépister davantage les séquences épitopiques CTL restreintes B et la présence d’épitope putatif variations dans les différents variants EBV Nous avons recherché les épitopes les plus marqués B-restreints dans les antigènes latents immunodominants EBNAA, EBNAB, et EBNAC en utilisant différents programmes de prédiction de liaison HLA Les séquences prototypes B des épitopes les plus marquants prédit YAM, GPK, et GPE de EBNAA, IPP et GAS d’EBNAB, et NPY et TPV de EBNAC ont été déterminés pour les patients avec PTLD montrant le contexte HLA B approprié de la p les souches EBV présentaient une variation distincte de l’épitope B-restreint situé dans la région C-terminale de l’EBNAA par rapport à la séquence prototype B au lieu de GPETRRVVV, ils présentaient l’épitope variant, DHEPRRVVV, pour lequel une liaison HLA réduite était prédite, suggérant une réponse immunitaire diminuée à ces variants de la souche EBV Tous les autres épitopes B-restreints analysés dans nos échantillons de patients, cependant, étaient hautement conservés, ce qui suggère plus fortement que l’association de l’allèle B avec PTLD est indépendante de EBNA variations Bien que l’association statistiquement significative entre le développement HLA B et PTLD dans la cohorte actuelle soit frappante, les résultats actuels doivent être confirmés par d’autres chercheurs. En outre, certains aspects doivent être clarifiés – par exemple le fait que tous nos patients , seul un seul allèle HLA B était présent, ainsi que le fait que certains de ces patients possédaient d’autres allèles HLA pour les épitopes dominants des lymphocytes T CD pour l’EBV ont été décrits Ainsi, il est également concevable qu’un autre marqueur génétique localisé dans la région HLA soit lié à l’allèle B et pourrait contribuer au développement des PTLD plutôt qu’à l’allèle HLA B lui-même. , nos découvertes fournissent, à notre connaissance, la première preuve que la molécule HLA B de complexe majeur d’histocompatibilité est significativement corrélée au développement de PTLD chez les receveurs de BMT. Des investigations à plus grande échelle et des analyses fonctionnelles seront nécessaires pour confirmer les résultats actuels. l’allèle HLA B peut être généralement accepté comme facteur de risque prédisposant les receveurs de BMT à PTLD

Remerciements

Nous remercions Claudia Kellner pour son excellente assistance technique Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: pas de conflits